致泻大肠埃希氏菌尺度魔难措施（三）

(八)尿素琼脂

卵白胨1g，致泻氯化钠5g，大肠葡萄糖1g，埃希磷酸二氢钾2g，氏菌0.4％酚红溶液3mL，尺度措施琼脂20g，魔难蒸馏水1000mL，致泻20％尿素溶液100mL，大肠pH7.2±0.1。埃希

将除了尿素以及琼脂之外的氏菌成份配好，并校对于pH，尺度措施退出琼脂，魔难加热凝聚并分装烧瓶。致泻121℃低压灭菌15min。大肠冷却至50～55⁰C，埃希退出经除了菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2％，最终pH为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。

试验措施：挑取琼脂哺育物接种，在36-1℃哺育24h，察看成果。

尿素酶阴性者由于产碱而使哺育基酿成红色。

(九)缓冲葡萄糖卵白胨水(V—P试验用)

V-P试剂

磷酸氢二钾5g，多胨7g，葡萄糖5g，蒸馏水1000mL，pH7.0。

凝聚后校对于pH，分装试管，每一管1 mL，121⁰C低压灭菌15min。

V—P试验措施：用琼脂哺育物接种本哺育基中，于36±1℃哺育2～4d。退出6％a-萘酚-酒精溶液0.5mL以及40%氢氧化钾溶液O.2mL，短缺振摇试管，察看成果。阴性反映赶快或者于数分钟内泛起红色，如为阴性，应放在36±l℃下哺育4h再妨碍审核。

(十)氰化钾(KCN)哺育基

卵白胨10g，氯化钠5g，磷酸二氢钾0.225g，磷酸氢二钠5.64g，蒸馏水1000mL，O.5％氰化钾溶液20mL，pH7.6。

将除了氰化钾之外的成份配好后分装烧瓶，121⁰C低压灭菌15min。放在冰箱内使其短缺冷却。每一100mL哺育基退出0.5％氰化钾溶液2.OmL(最后浓度为l:10000)，分装于12妹妹×100妹妹灭菌试管，每一管约4mL，赶快用灭菌橡皮塞塞紧，放在4⁰C冰箱内，至少可保存2个月。同时，将不加氰化钾的哺育基作为比力哺育基，分装试管备用。

试验措施：将琼脂哺育物接种于卵白胨水内成为稀释菌液，挑取一环接种于氰化钾(KCN)哺育基。并另挑取一环接种于比力哺育基。36±1⁰C哺育1～2d，察看成果。若有细菌妨碍即为阴性(不抑制)，经2d细菌始终滞为阴性(抑制)。

氰化钾是剧毒药物，运历时理当心，切勿熏染，省患上中毒。夏先天装哺育基应在冰箱内妨碍。试验失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，发生氢氰酸气体逸出，导致药物浓度飞腾，细菌妨碍，因此组成假阴性反映。试验时对于每一关键都要特意留意。

(十一)卵白胨水(靛基质试验用)

卵白胨(或者胰卵白胨)20g，氯化钠0g，蒸馏水1000mL，pH7.4。

按上述成份配制，分装小试管，121⁰C低压灭菌15min(卵白胨中应含有丰硕的色氨酸。置办每一批卵白胨后，应先用已经知菌种判断前方可运用。)

(十二)靛基质试剂

柯凡克试剂：将5g对于二甲氨基苯甲醛消融于75mL戊醇中。而后飞快退出浓盐酸25mL。

欧一波试剂：将1g对于二甲氨基苯甲醛消融于95mL 95%酒精内。而后飞快退出浓盐酸20mL。

试验措施：挑取小量哺育物接种，在36±1⁰C~哺育1～2d，需要时可哺育4～5d。退出柯凡克试剂约O.5mL，轻摇试管，阴性者于试剂层呈深红色；或者退出欧一波试剂约O.5mL，沿管壁流下，拆穿困绕于哺育液概况，阴性者与液面打仗处呈玫瑰红色。

(十三)半固体琼脂

卵白胨lg，牛肉膏0.3g，氯化钠O.5g，琼脂0.35～O.4g，蒸馏水100mL，pH7.4。

按以上成份配好，煮沸使消融，并校对于pH。分装小试管。121⁰C葛压灭菌：15min，挺立凝聚备用。

(十四)Elek氏哺育基(毒素测定用)

豚胨20g，麦芽糖3g，乳糖O.7g，氯化钠5g，琼脂15g，40%氢氧化钠溶液1.5mL，蒸馏水1000mL，pH7.8。

用500mL蒸馏水溶破除了琼脂之外的成份，煮沸，并用滤纸过滤。

用1mol／L氢氧化钠校对于pH。用此外500mL蒸馏水加热消融琼脂。

将两液混合，分装试管：10mL或者20mL。121⁰C低压灭菌：15min。临历时加热凝聚琼脂倾注平板。

(十五)氧化酶试剂

1％盐酸二甲基对于苯二胺溶液：大批别致配制，于冰箱内避光保存。

1％a-萘酚溶液。

取清银白滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对于苯二胺溶液一滴，阴性者呈粉红色，并逐渐加深，再加一滴a-萘酚溶液，阴性者于30s内泛起鲜蓝色。阴性于2min内巩固色。

（十六）乳糖胆盐发酵哺育基

成份：卵白胨20g，猪胆盐（或者牛、羊胆盐）5g乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，蒸馏水1000mL，pH7.4。

(十七)三糖铁琼脂(TSI)制备措施哺育基。

成份：卵白胨20g，牛肉膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，氯化钠5g，硫酸亚铁铵[Fe(NH₄)₂(SO₄)]₂0.2g ，硫代硫酸钠0.2g，琼脂12g，酚红0.025g，蒸馏水1000mL，pH7.4。

制法：将除了琼脂以及酚红之外的各成份消融于蒸馏水中，校对于pH，退出琼脂煮沸凝聚，退出0.2％酚红水溶液12.5mL，摇匀，分装试管，121℃低压灭菌15min，部署高层斜面备用。

(十八)赖氨酸脱羧酶试验哺育基制备措施哺育基。

成份：卵白胨5g，酵母浸膏3g，葡萄糖1g，蒸馏水1000mL，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，L-氨基酸或者DL氨基酸0.5或者1g/100mL。

制法：除了氨基酸之外的成份加热消融后，分装每一瓶100mL，分说退出种种氨基酸：赖氨酸、精氨酸以及鸟氨酸。L-氨基酸按0.5%退出，DL-氨基酸按1％退出，校对于pH至6.8，比力哺育基不加氨基酸，分装于灭菌的小试管内，每一管0.5mL，下面加一层液体石蜡，115℃低压灭菌10min。

试验措施：接种哺育物于36±1℃哺育18-24h，察看成果，氨基酸脱羧酶阴性者，由于产碱哺育基应呈紫色，阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使哺育基酿成黄色，对于把守应为黄色。

(十九)Honda氏产毒肉汤

水解酪卵白20g，酵母浸膏粉10g，氯化钠2.5g，磷酸氢二钠15g，葡萄糖5g，微量元素O.5mL，蒸馏水1000mL，pH7.5。

制法：消融后校对于pH，低压灭菌121⁰Cl5min，待冷45-50⁰C时退出林可霉素溶液，每一毫升哺育基内含90μg。

微量元素配方：

硫酸镁5g，三氯化铁 O.5g，氯化钻2g，蒸馏水100mL。

(二十)致病性大肠埃希氏菌诊断血清、侵袭性大肠埃希氏菌诊断血清、产肠毒素大肠埃希氏诊断血清、出血性大肠埃希氏菌诊断血清。

(二十一)产肠毒素大肠埃希菌LT以及ST酶标诊断试剂盒，上海市卫生防疫站出品。

(二十二)抗LT抗毒素。

(二十三)多粘菌素B纸片：300IU，φ16妹妹。

(二十四)革兰氏染色液。

参考质料：食物卫生微生物魔难尺度手册

相关链接：尿素琼脂，磷酸氢二钾，卵白胨水

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